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    藻類培養基——植物組織培養

    發表時間:2024/03/20 16:01:27  瀏覽次數:1879  
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    藻類培養基可由濃縮溶液或粉末鹽混合物制備而成。濃縮溶液組分較完整,包含維生素,應冷凍保存。而粉末培養基則可以靈活地自定義培養基的最終組分。這類用于制備水生物種生長培養基的粉末由“富集”鹽混合物和完全合成培養基的鹽混合物組成。將粉末或濃縮溶液分別加入淡水或海水中以制備富含淡水或海水的培養基。為了制備合成海生生長培養基,將粉末添加到組織培養級淡水中。已公布的水生物種生長培養基配方通常含有碳酸氫鈉。我們的粉末混合物中不包含碳酸氫鈉,應視需要添加在培養基中,如果感興趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具體內容。

    粉末培養基極易吸濕,必須防止空氣中的水分對其潮解。單個包裝的全部粉末應盡可能在打開后立即使用。不建議以濃縮形式制備培養基,否則一些鹽復合物可能會沉淀。添加到培養基中的補充劑可能會影響其保質期和儲存條件。制備培養基的基本步驟如下:

    1. 量取終體積約90%的淡水或海水量,例如:終體積為10 L則量取9L。選擇一個容量是終體積兩倍的容器。

    2. 在攪拌水的同時加入粉末狀培養基并攪拌直至完全溶解。某些情況下可能需要加熱將粉末溶解。

    3. 用少量水沖洗粉末原包裝,以去除痕量的粉末。添加到步驟2的溶液中。

    4. 根據需要,加入碳酸氫鈉(NaHCO3)或其他緩沖液;攪拌至溶解。添加所需的熱穩定補充劑(例如蔗糖、瓊脂、維生素、生長素、細胞分裂素等)

    5. 加入更多的水使培養基達到終體積。

    6. 根據需要,使用NaOH、HCl或KOH將培養基調節至所需pH。

    7. 如果加入膠凝試劑,則加熱直至溶液澄清。

    8. 根據需要,在高壓滅菌之前(或之后)將培養基加樣到培養皿中。高壓滅菌后加入熱不穩定的組分。

    9. 液體培養基可使用0.22 μM過濾器過濾滅菌,或在有效的高壓滅菌器中以1 kg / cm2(15 psi)、121°C滅菌,滅菌時間按照培養基滅菌方案中所述。

    10. 待培養基冷卻后使用。

    粉末狀培養基和堿性鹽混合物僅供實驗室使用。不適用于醫用、家用或其他用途。

    自備材料

    生長素、細胞分裂素、碳水化合物、膠凝劑和其他補充劑見生物化學部分。

    儲存方法

    將干燥培養基儲存于0-5°C的干燥器中。粉末培養基變質可以通過以下方式識別:1)顏色變化;2)粉末中的造粒、結塊或顆粒物;3)pH變化;或4)正確使用時無法促進生長。

    培養基中的沉淀

    植物組織培養基中隨著時間推移會產生沉淀。已經分析了沉淀物(未發表內部數據;Dalton等,1983),它們由微小的淺黃白色顆粒組成。沉淀物的分析表明其主要含鐵、磷酸鹽和鋅。導致沉淀物產生的可能原因是亞鐵離子不可避免地氧化成三價鐵離子以及未螯合的鐵離子的存在。當磷酸鐵的含量超過其溶解度時,也會發生沉淀。尚未有報道表明沉淀物會對植物組織培養物的生長和發育產生有害影響。

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